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乳酸菌活菌數量檢測方法


                      乳酸菌活菌數量檢測方法--菌落計數法
 
本方法適用于乳酸菌制劑及配合飼料中有效活菌數和雜菌率的測定。
 
按照國家標準GB/T 14699.1進行抽樣,獲得樣品200g,分裝于兩個無菌、干燥的玻璃瓶中,貼上標簽,注明產品名稱、批號、取樣日期等信息。一瓶供檢驗用,一瓶密封保,以備復查。
 
一、測定原理:
乳酸腸球菌用腸球菌瓊脂培養基,雜菌用營養瓊脂培養基;培養后利用平板菌落計數法進行計數。
 
二、培養基與緩沖液配方:
(1)營養瓊脂培養基,每L
蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g 氯化鈉 5.0g 瓊脂 18.0g 水稀釋至
1000ml PH 7.0~7.4
(2)腸球菌瓊脂培養基,每L
蛋白胨 20.0g蔗糖 5.0g 葡萄糖 5.0g 乳糖 5.0g 酵母膏 5.0g
氯化鈉 4.0g 乙酸鈉 1.5gVc 0.5g 瓊脂 17.0g 水稀釋至1000ml
PH 6.5~7.0
(3)PH6.8磷酸緩沖液配制方法
取0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液250ml,加0.2mol/L氫氧化鈉溶液118ml,用水稀釋至1000ml,搖勻即得。
 
三、樣品處理:
(1)乳酸菌純品制劑樣品
測定乳酸菌純品制劑時,取樣量為1g,溶解到100ml緩沖液中,緩沖液與樣品的比例為100:1。
(2)配合飼料樣品
測定飼料樣品時,取樣量為25g,溶解到225ml緩沖液中,緩沖液與樣品的比例為10:1。
 
四、有效活菌數、雜菌數的測定:
(1)本方法采用平板菌落計數法
(2)操作方法:
1.取磁力攪拌棒裝入500ml三角瓶中,再量225ml PH6.8的磷酸緩沖液一并裝入三角瓶中滅菌備用。純品制劑量取緩沖液100ml。
2.取25g飼料樣品放入三角瓶中,在磁力攪拌器中震蕩混勻5min后,再放到搖床上37℃,150轉/分,充分震蕩45min,混勻成1:10稀釋液。純品制劑樣品量為1g,混勻成1:100稀釋液。
3.在超凈工作臺內用滅菌的1.5ml離心管,按10倍比稀釋法稀釋。用移液器吸取上述混懸液100ul,注入含有900ul緩沖液的離心管內,并在液體中反復吹打5次,在漩渦振蕩器上震蕩30s混勻(注意每次稀釋時更換槍頭及充分震蕩混勻)。
4.按上述操作順序,做10倍比稀釋,純品制劑推薦稀釋到10-8,配合飼料推薦稀釋到10-4。
5.選擇4個適宜稀釋度,吸取該稀釋度的液體10 ul滴于滅菌平皿上,每個稀釋度做3個平行。(注意分三點滴,便于液體充分散開
6.置于燭缸中37培養36 h后,計數菌落。
(3)計算公式:
1、有效活菌數:
a.計算出平皿同一稀釋度3個平行組的菌落平均數。
b.產品活細胞數=菌落平均數×稀釋倍數×10
2、雜菌率①:雜菌率(%)= [雜菌數÷(有效活菌數+雜菌數)]×100%
 
           注① 只對乳酸菌純品制劑進行評定,對配合飼料不采用這個指標。
 
 
 
                                    北京中科景明生物技術有限公司
被带到仓库糟蹋
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